4.4. Противовирусные препараты широкого спектра действия (интерфероны) [6]

Под влиянием индукторов интерферона (многочисленных синтетических и природных агентов) осуществляется индукция, итогом которой является депрессия генов интерферона, которые локализуются во 2-й, 9-й и ,возможно, в 5-й и 13-й хромосомах человека. В ответ на индукцию происходит формирование, синтез интерферона в клетках человеческого организма.

Основным показателем активности индукторов интерферона является продукция так называемого «сыворо-точного» интерферона в крови.

При энтеральном способе введения индукторов в организм, интерфероновый ответ обеспечивается лимфоцитами (эритроцитами) системы GALT лимфоцитной ткани желудочно-кишечного тракта, сконцентрированной в виде вальдеерова кольца, пееровых бляшек, подслизистых монону-клеаров и мемфоцитов тонкой кишки и аппендикса, куда они могут быть доставлены популяцией специализированных мембранных клеток, способных транспортировать макромолекулы из стенки тонкой кишки через эпителиальный барьер. Большая часть продуцируемого при этом интерферона может быть утилизирована окружающими клетками кишечника локально и не достигает циркулирующей крови (паракринный тип). Другая часть продуцированного интерферона попадает в кровь или непосредственно из тканевой жидкости (эндокринный тип), или через мигрирующие лимфомоноциты и макрофаги. Продукция интерферона в кишечнике опережает и превосходит уровень его образования в других органах [12].

При пероральном введении высокомолекулярных индукторов интерферона, заключенных в липосомы (полигуацил, ларифан), преимущественным местом образования интерферона становится печень, а именно – гепатоциты и купферовы клетки. Хотя и в этом случае первой линией взаимодействия индуктора с организмом является кишечник, в нем синтезируется значительное количество интерферона, но в составе липосом более 80% индуктора транспорти-руется в печень, поэтому уровень продукции интерферона в этом органе в 2-4 раза выше, чем в кишечнике [12].

Таким образом, при поступлении индукторов интерферона в организм наряду с продукцией сывороточного интерферона в организме происходит автономная ,локальная продукция интерферона органами .При этом ведущая роль в продукции интерферона тем или иным органом определяется в равной степени как путями индукции интерферона , так и составом индуктора , а , следовательно, и чувствительностью интерферонокомпетентных клеток к использо-ванному индуктору.

После образования интерферона в органах, он поступает в кровь и присоединяется к так называемому «сывороточному» интерферону (синтезировался в крови, сыворотке под влиянием индукторов). Дальнейшее противовирусное действие интерферона может быть представлено в виде схемы [13].

4.5. Амиксин – возможности и перспективы применения в клинической практике

Изыскание и изучение новых фармакологических средств является одной из важнейших проблем современной медицины. Успех в производстве нового лекарственного препарата – это результат глобальной долгосрочной стратегии. При этом шансы на успешное завершение работ по созданию нового лекарства весьма незначительны, примерно 1 к 5000 – 10000, а процесс разработки и продвижения на рынок нового препарата  занимает 12-15 лет.

Разработка новых лекарственных средств борьбы с заболеваниями 21 века является приоритетным направлением деятельности компании «ЛЭНС-Фарм». Особый интерес вызывают препараты, повышающие сопротивляемость организма к инфекционным факторам. Одним из таких препаратов является Амиксин.

СХЕМА ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ СИСТЕМЫ ИНТЕРФЕРОН

Путь Амиксина в клиническую практику включал в себя ряд последовательных этапов прохождения разрешительных инстанций. Все параметры эффективности и безопасности подтверждены документально, начиная с исходного состояния до измерений, проводимых в процессе экспериментального лечения (форма дозировки, способ применения, режим приема, план подбора дозы, срок лечения). К настоящему времени сформировалось представление о потенциально эффективных курсах лечения Амиксином и потребности в нем в первую очередь при заболеваниях, для лечения и профилактики которых не существует удовлетворительных методов. При этом уточнялись влияние выбранных заболеваний на пациентов и общество в целом, недостатки, которые присущи существующим способам лечения, характеристики, которыми обладает Амиксин для улучшения любого из имеющихся способов лечения.  Экономическая оценка основывалась на данных сравнения с альтернативными действиями. Особое внимание уделялось ответам на вопросы, во что обходится пациенту и (или) обществу получение желаемого результата. Доказательства эффективности и экономической целесообразности лечебно-профилактических возможностей Амиксина  явились основанием для включения препарата в стандарты лечения и профилактики, а также  компенсации стоимости лечения Амиксином при таких заболеваниях, как вирусные гепатиты, грипп и другие острые респираторные инфекции, геморрагические лихорадки.

Весьма важным явилось создание по результатам исследований информационно-аналитического сборника. При обобщении опыта применения Амиксина определяющая роль отводилась формализованным методам, что позволило выработать наиболее согласованные рекомендации для реальной практики. Ценность представляемой в настоящем сборнике информации определяется с одной стороны - научной обоснованностью, признаваемой ведущими учеными и специалистами, с другой - связью с решением вопросов целенаправленного и рационального использования Амиксина  в реальной практике.

4.5.1. Название и описание препарата Амиксин

·                    Регистрационный номер 96/252/1; 96/252/3.

·                    Международное непатентованное название – Тилорон (2,7,-bis [2-(diethylamino) ethoxy]-9h-fluoren-9-one-dihydrochloride).

·                    Низкомолекулярное синтетическое соединение ароматического ряда, относящееся к классу флуоренонов.

·                     Таблетки, покрытые оболочкой по 6 и 10 штук в упаковке в дозе 0.125 г (взрослая форма) и 0.06 г (детская форма)

4.5.2. Противовирусная активность и индукция клеток – продуцентов интерферона.

Амиксин обладает противовирусным действием в отношении широкого круга вирусов.

Амиксин индуцирует образование интерферона как первого (альфа, бета), так и второго (гамма) типов.

Амиксин  «включает» синтез интерферона в отличие от поликлональной индукции в определенных популяциях клеток.

Индукция интерферона осуществляется  без вспомогательных клеток, что доказано в экспериментах с чистой культурой, в частности - Т клеток.

По интенсивности и продолжительности действия Амиксин проявляет лучшие качества индукторов: «выработка» позднего  интерферона, время максимального ответа 10 - 18 часов.

4.5.3. Действие на  иммунную систему и воспалительный процесс.

·                    Экспрессия на мембранах клеток молекул HLA 1 класса, антигенов HLA-DR 2 класса. 

·                    Рост и активация NK-клеток.

·                    Восстановление  функциональной полноценности антител.

·                    Целенаправленная поляризация Th0                Th1.

·                    Моделирование воспалительной реакции в зависимости от фазы воспаления.

4.5.4. Фармакокинетика

·                    Всасывание. После приема внутрь Амиксин быстро абсорбируется из желудочно-кишечного тракта.

·                    Распределение. Биодоступность составляет 60%, около 80% препарата связывается с белками плазмы.

·                    Выведение. 99% препарата выводится в неизмененном виде, период полувыведения составляет 48 часов.

4.5.5. Доклинические исследования противовирусная активность препарата

Противовирусная активность Амиксина оценивалась на лабораторных животных, инфицированных возбудителем геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) - вирусом Хантаан. Использовались профилактическая, лечебно-профилактическая и лечебная схемы введения препарата белым мышам. Установлена наибольшая противовирусная активность Амиксина при использовании лечебно-профилактической схемы перорального введения в дозе 10 мг/кг.

Противовирусная активность Амиксина и его влияние на интерфероновый статус при гепатите  исследовались на самцах белых нелинейных мышей массой 16-18 г. Вирус (штамм Мещерина) пассировали путем внутрибрюшинного заражения белых мышей. Для воспроизведения энтерального гепатита мышам перорально вводили по 0,2-0,3 мл 30-40% суспензии печени зараженных животных на физиологическом растворе. За 1-7 дней  до заражения животным опытной группы перорально вводили Амиксин в дозе 4 мг. За животными наблюдали 14 дней. Однократное введение амиксина 4 мг обеспечивало 40-50% защиту животных от энтерального заражения мышей в течение 72 часов после введения препарата.

Изучено профилактическое и лечебное действие Амиксина в концентрации 0,25 г на кг веса против вируса лихорадки Западного Нила в опытах на белых мышах. Профилактическое введение Амиксина приводило к снижению летальности в опытной группе в среднем на 23,4%.

5. ПОЛУЧЕНИЕ противовирусных ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

5.1.         Новые пути синтеза хлоргидрата тилорона [8, 9]

(2,7-бис-[2-(диэтиламино)этокси]-флуорен-9-он

Синтезирован двумя способами тилорон-2,7-бис[(диэтиламино)этокси] флуоренон-9(I)

Нитрованием флуоренона-9(II) HNO3 получен 2,7-(O2N)2-II (Т. пл. 289 – 91º), восстановленный ZnCl2 в HCl и AcOH до 2,7-(H2N)2-II (Т. пл. 287 – 9º), диазотированием которого NaNO2 в 50%-ной HBF4 получено соответственно бис-диазосоединение (III) переведенное действием 50%-ной H2SO4 в 2,7-(HO)2-III (IV, т. пл. 320 – 2º). Ацетилированием флуорена (V) AcCl и AlCl3 синтезирован 2,7-Ac2-V (т. пл. 180 – 2º), превращенный действием 3-ClC6H4COOOH в присутствии F3CCOOH в 2,7-(AcO)2-V (VI), который окислен Na2Cr2O7 в AcOH до 2,7-(AcO)2-II (VII). Взаимодействием IV или VII с KOH и Et2NCH2CH2Cl*HCl получен I.

0,099 моля 85%-ной 3-ClC6H4COOOH прибавляют к охлажденной смеси 0,037 моля 2,7-Ас2-V, 400мл ХЛФ и 0,3мл F3CCOOH, защищают от света, нагревают до 20ºС, выдерживают три дня, хлороформный раствор промывают насыщенным раствором Na2CO3 и насыщенным раствором NaCl, органический слой сушат безводным MgSO4, фильтрат упаривают, получают IV, выход 62%, т. пл. 165 – 7ºС (МеОН – хлф1).

0,034 моля VI, 0,01 моля Na2Cr2O7*2H2O, 30мл АсОН кипятят 45 минут, раствор охлаждают, прибавляют 50мл воды, выделяют VII, выход 53%, т.пл. 224,5-6,5º (СП).

0,04 моля Et2NCH2CH2Cl*HCl, 0,08 моля KOH, 0,01 моля IV или VII 0,5г PhCH2NMe3Br, 200мл толуола и 50мл воды кипятят 24 часа, после охлаждения отделяют органический слой, промывают водой, насыщенным раствором NaCl и высушивают безводным MgSO4, толуол упаривают в вакууме, масло растворяют в 5мл МеОН прибавляют к 50 мл эфирн. ненасыщенного HCl. Выделяют ди-ХГ (I) 50%, т.пл. 232 – 4º (изо-PrOH-MeOH, 3:1).

5.2.         Получение бонафтона (6-бром-1,2-нафтохинон)

Получение 6-бромнафтохинона-1,2 с нитрозодисульфонатом калия [10]

Реакцией β-нафтол с Br2, в лед АсОН получен с выходом 76% 6-бромнафтол-2(I), т.кип. 200 - 5º /20 т.пл. 128ºС. Взаимодействием I c ON(SO3K)2 в дистиллированной воде при добавлении 1/6 н KH2PO4 приводит к 6-бромнафтохинону-1,2, т.пл. 170º(разл).

Бонафтон – 14С  [11]

Разработан метод синтеза [8 – 14С]-6-бром-1,2-нафтохинона (I, бонафтона), обладающего противовирусной активностью, взаимодействием 4-MeOC6H4CH2CH2CH2Br с Mg и 14CO2 получают 4- MeOC6H4CH2CH2CH2-14COOH (II). Циклизация (II) ПФК дает [1-14С]-7-метокси-1-тетралон (III), восстановление которого на Pd/С приводит к [1-14С]-7-метокситетралину (IV). Дегидрирование IV при помощи тетрахлор-1,2-бензохинона приводит к [1-14С]-7-метоксинафталину(V-неролину-14С) из V и HBr получают [8-14С]-2-нафтол(VI), бромирование которого дает [1-14C]-3,8-дибром-7-оксинафталин (VII). Из VII получают [8-14C]-6-бром-2-нафтол (VIII). Реакция VIII с ON(SO3K)2 приводит к (I).

5.3. ГОССИПОЛ

2,2-бис-(1,6,7-триокси-3-метил-5-изопропил-8-альдегидонафтил)